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如何選購合適的PCR耗材

 更新時(shí)間:2023-02-02 點(diǎn)擊量:1171
如何選購合適的PCR耗材

PCR耗材包括PCR管(EP管)、8連排管、96孔PCR板、深孔板等這些材質(zhì)一般為聚丙烯PP材質(zhì),具有高品質(zhì)、高純度、高透明的特點(diǎn),一般都在潔凈空間生產(chǎn)加工。

PCR耗材為什么一般都是PP材質(zhì)的呢,為什么需要環(huán)境潔凈?

因?yàn)镻CR/qPCR耗材通常會(huì)與試劑或樣品直接接觸,而聚丙烯(PP)材質(zhì)是生物學(xué)惰性材料,表面不易于粘附生物分子,且有著良好的化學(xué)耐性,及溫度耐受性(可以121℃ 高壓滅菌,也可以承受熱循環(huán)過程中的溫度變化)。

這里強(qiáng)調(diào)一下耗材質(zhì)量(是否干凈)的重要性。PCR耗材必須保證沒有污染物和抑制劑。高壓和輻射能夠去除細(xì)菌和DNA酶,但不能去除灰塵和DNA殘留,它們可能會(huì)抑制PCR反應(yīng)或產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。物質(zhì)是具有吸光度的,即便是很小的污染物也會(huì)吸收反應(yīng)體系中的熒光,影響熒光信號(hào)的采集。因此,在生產(chǎn)這些塑料耗材時(shí),從制模到最終的包裝都必須在具有顆粒數(shù)量限制的設(shè)施環(huán)境中進(jìn)行。

高熱傳遞性

1)極薄的壁厚優(yōu)化熱傳遞減少循環(huán)時(shí)間。

之前買的PCR板/管材質(zhì)厚度不一,是不是厚點(diǎn)的穩(wěn)定性更好呢?

不是的,管壁厚度會(huì)直接影響熱傳導(dǎo)率,極薄的壁厚可優(yōu)化熱傳遞減少循環(huán)時(shí)間。要想提升PCR反應(yīng)效率,保證反應(yīng)穩(wěn)定高效進(jìn)行,需要選擇均一、超壁薄的PCR耗材。

高反射熒光信號(hào)

1)qPCR更推薦使用優(yōu)質(zhì)的白色PCR耗材。

2)管蓋:高透光性,蓋子的光通過率直接關(guān)系著儀器的信號(hào)采集,選擇一款透光性高的蓋子對熒光定量檢測極其重要。

不同顏色的PCR管/板,該怎么選呢?

對于普通的PCR反應(yīng)選用透明或者彩色的PCR管都是可以的,而彩色透明的PCR管更有助于進(jìn)行樣品分類管理。但qPCR更推薦選用優(yōu)質(zhì)的白色PCR耗材。由于qPCR需要實(shí)時(shí)定量檢測熒光信號(hào)強(qiáng)度,更需要靈敏、精確的熒光信號(hào)傳遞。實(shí)驗(yàn)證明,與傳統(tǒng)的透明PCR產(chǎn)品相比,白色PCR產(chǎn)品可大程度地反射熒光信號(hào),減少孔間信號(hào)交叉污染,可優(yōu)化實(shí)時(shí)熒光定量PCR的結(jié)果。

高防污染性

1)蓋子要緊密,蓋子與管子的適配性要好,可以減少交叉污染。

2)PCR板要具有升孔緣,有利于密封。

3)一端有手持條,聯(lián)排蓋一端要有突出的手持端,開蓋減少污染。

為什么有的PCR板孔是凸出的,有的卻是平的呢,哪個(gè)更好?

適合的才是好的。常見的PCR板有平孔緣和加高孔緣兩種。

平孔緣的反應(yīng)板,可適用于大多數(shù)的PCR儀。

升孔緣的反應(yīng)板,便于封膜,可降低樣品間的交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。

高辨識(shí)性度

1)具有數(shù)字字母標(biāo)識(shí),有助于識(shí)別單個(gè)孔及樣品位置。2)具有切角,便于辨認(rèn)方向。

對于96孔或者384孔板,為什么切角和標(biāo)識(shí)都不是很相同呢?

這是由切角和標(biāo)識(shí)的作用決定的。

切角:PCR板的切角位置選擇取決于適配儀器要求,便于定位。

標(biāo)識(shí):PCR板的數(shù)字字母標(biāo)記有助于識(shí)別單個(gè)孔及樣品位置。一般為凸出的顏色數(shù)字標(biāo)識(shí)或者印刻標(biāo)識(shí)。對于一些自動(dòng)化應(yīng)用實(shí)驗(yàn),印刻標(biāo)記的反應(yīng)板密封性會(huì)更好。

體積精確

1)密封性:緊密的蓋子,或者其他方式比如封膜減少蒸發(fā)。

不同體積的PCR管/板,該怎么選呢?

選擇宗旨:依據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求選用合適的產(chǎn)品。PCR管的體積大多數(shù)都可以滿足PCR反應(yīng)的要求。在此基礎(chǔ)上,推薦優(yōu)先選用低容管。因?yàn)榈腿莘磻?yīng)管/板有著較小的上方空間,可提高熱傳導(dǎo)率并降低蒸發(fā)。同時(shí),在加樣時(shí)需要避免加樣過量或過少。過量會(huì)導(dǎo)致熱傳導(dǎo)率下降,溢出及交叉污染,而過少可能會(huì)造成樣品蒸發(fā)損失。

常見反應(yīng)管的規(guī)格及體積:

單管/8聯(lián)管/12聯(lián)管:0.5mL,0.2mL,0.15mL,0.1mL

96孔板:0.2mL,0.15mL,0.1mL

384孔板:0.04mL

易操作性

PCR耗材操作起來簡單易行,如:蓋子好蓋但不影響密封性等。PCR耗材要與PCR儀器適配性好。

對于96孔或者384孔板,為什么有的有裙邊,有的沒有呢?

其實(shí)PCR/qPCR板的裙邊是為了更好地適應(yīng)自動(dòng)化應(yīng)用,可為儀器提供穩(wěn)定的支持和機(jī)械耐受強(qiáng)度,且移液過程中的穩(wěn)定性也會(huì)更高。PCR板一般分為無裙邊、半裙邊、全裙邊。

無裙邊板:可適用于大多數(shù)的PCR儀或qPCR儀,但不適用于自動(dòng)化應(yīng)用。移液過程中穩(wěn)定性不高,需要配合板托使用。半裙邊板:可適配標(biāo)簽或應(yīng)用條碼,及自動(dòng)化應(yīng)用,且有著較好的移液穩(wěn)定性。全裙邊板:非常適用于自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)應(yīng)用,也可適配標(biāo)簽及應(yīng)用條碼。機(jī)械強(qiáng)度較好,可適用于凸出模塊的PCR儀,且移液過程中穩(wěn)定性高。

PCR封板膜有好多種類型,哪種實(shí)驗(yàn)效果更好呢?

根據(jù)具體的PCR實(shí)驗(yàn)要求選用適配的高質(zhì)量封板膜,不僅能有效地保護(hù)樣品,防止污染,還可以提供可信賴的實(shí)驗(yàn)檢測數(shù)據(jù)。

提供溫度耐受性和密封性強(qiáng)、高透明度、操作簡便的高質(zhì)量PCR/qPCR膜。

     蘇州阿爾法生物提供的PCR耗材包括:0.2mlPCR管、PCR8聯(lián)排管、八排管、96孔PCR板、酶標(biāo)板、封板膜等,同時(shí)提供熒光定量PCR儀、凝膠成像儀、電泳儀等實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備等。