人多能干細(xì)胞(hPSC)具有自我更新和分化為各種細(xì)胞類型的潛能,為醫(yī)學(xué)、藥物研發(fā)和生命科學(xué)研究提供了不少貢獻(xiàn)。近年來,隨著生物技術(shù)的發(fā)展,hPSC的培養(yǎng)技術(shù)不斷優(yōu)化,其中多層細(xì)胞工廠作為一種高效的2D培養(yǎng)方法,逐漸受到研究者的關(guān)注。本文將為您揭秘如何通過多層細(xì)胞工廠進(jìn)行hPSC的2D培養(yǎng)。
一、多層細(xì)胞工廠的優(yōu)勢
1. 高密度培養(yǎng):多層細(xì)胞工廠采用層疊式設(shè)計,可充分利用空間,實現(xiàn)細(xì)胞的高密度培養(yǎng),提高產(chǎn)量。
2. 易于操作:細(xì)胞工廠的操作簡便,便于規(guī)?;a(chǎn)。
3. 條件均一:細(xì)胞工廠內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,有利于細(xì)胞生長和分化。
4. 產(chǎn)量可控:通過調(diào)整細(xì)胞工廠的層數(shù),可輕松實現(xiàn)產(chǎn)量的調(diào)控。
二、如何通過多層細(xì)胞工廠進(jìn)行hPSC的2D培養(yǎng)
1. 細(xì)胞接種
將hPSC接種到預(yù)先處理過的細(xì)胞工廠中,確保細(xì)胞均勻分布。接種密度可根據(jù)實驗需求進(jìn)行調(diào)整。
2. 日常培養(yǎng)
接種后第1、3和4/5天進(jìn)行補(bǔ)料,監(jiān)測配套燒瓶以確定最佳收獲日期(≥ 90%匯合度)。具體操作如下:
(1)將廢培養(yǎng)基倒入廢液瓶中,更換新鮮培養(yǎng)基。
(2)更換培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱。
3. 收獲細(xì)胞
當(dāng)配套燒瓶匯合度達(dá)到90 - 95%時(接種后第5 - 6天)收獲細(xì)胞工廠的hPSC。具體步驟如下:
(1)將用過的培養(yǎng)基倒入廢液瓶中。
(2)用200 mL PBS沖洗細(xì)胞工廠。
(3)添加200 mL TrypLE™ Express或0.25%胰蛋白酶-EDTA。
(4)37°C孵育8 - 10分鐘。
(5)將200 mL ACF酶抑制溶液或TeSR™-AOF添加到燒瓶中,混勻后倒入無菌1 L瓶中。
(6)用400 mL無菌PBS沖洗細(xì)胞工廠,倒入同一無菌收集瓶中。
(7)將細(xì)胞懸浮液分裝到離心管中,離心后去除殘留的解離試劑,重新懸浮并匯集細(xì)胞。
三、實驗結(jié)果
1. 未分化狀態(tài)的標(biāo)志物表達(dá)
從細(xì)胞工廠收獲的hPSC表達(dá)了未分化狀態(tài)的標(biāo)志物,如OCT-4和TRA-1-60,超過90%的細(xì)胞均表達(dá)這兩種標(biāo)記物。
2. 冷凍后仍保持高活力并有效附著
從細(xì)胞工廠收獲的單細(xì)胞hPSC在-135°C的FreSR™-S中冷凍后,仍保持高活力并有效附著。
3. 三譜系分化
從細(xì)胞工廠收獲的hPSC具有三譜系分化能力,可分化為定形內(nèi)胚層、早期中胚層和神經(jīng)祖細(xì)胞。
4. 保持正常核型
從細(xì)胞工廠收獲的hPSC保持正常核型,擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模后,細(xì)胞未檢測到額外的拷貝數(shù)變異。
通過本文的介紹,相信您已對如何通過多層細(xì)胞工廠進(jìn)行hPSC的2D培養(yǎng)有了深入了解。多層細(xì)胞工廠作為一種高效的2D培養(yǎng)方法,為hPSC的研究和應(yīng)用提供了有力支持。在今后的研究中,多層細(xì)胞工廠將繼續(xù)發(fā)揮其優(yōu)勢,助力hPSC領(lǐng)域的發(fā)展。
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