細(xì)胞培養(yǎng)需要注意什么
細(xì)胞培養(yǎng)需要注意什么
細(xì)胞培養(yǎng)是細(xì)胞和分子生物學(xué)中使用的關(guān)鍵工具。它可以對細(xì)胞生理學(xué)和細(xì)胞生物化學(xué)進(jìn)行建模。此外，細(xì)胞培養(yǎng)使研究人員能夠確定藥物和有毒化合物對細(xì)胞反應(yīng)的影響。那么怎么培養(yǎng)出一批好的細(xì)胞呢？細(xì)胞培養(yǎng)需要注意什么？
細(xì)胞培養(yǎng)需要注意以下幾點：
一、細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境
不同的細(xì)胞，培養(yǎng)環(huán)境是不同的。這個不僅僅是說培養(yǎng)基的不同，還有就是細(xì)胞生長的空間密度問題。有一些細(xì)胞是數(shù)量多一點比較好生長，生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細(xì)胞，比如：內(nèi)皮細(xì)胞。而有一些是細(xì)胞是數(shù)量少一點細(xì)胞狀態(tài)會生長的比較好，例如：巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞。尤其是巨噬細(xì)胞，生長速度快，貼壁速度也快，所以傳代時就應(yīng)該留很少量的細(xì)胞，這樣細(xì)胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細(xì)胞比較喜歡扎堆生長，而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候，細(xì)胞形態(tài)基本上就會差了，老化的會比較多，對后期實驗結(jié)果是不好的。所以進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的時候應(yīng)該多探索該細(xì)胞喜歡的生長空間密度和生長規(guī)律等相關(guān)問題，才能培養(yǎng)出理想的細(xì)胞。
二、良好的細(xì)胞形態(tài)
對于有些人總是會遇到養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細(xì)胞，如果細(xì)胞形態(tài)不好，（或者細(xì)胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時候進(jìn)行如下操作：
1.倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養(yǎng)基，進(jìn)行預(yù)吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。（巨噬細(xì)胞我們只吹打，不消化的）
2.把吹打下來的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時間點觀察細(xì)胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個時間點，已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長情況以及形態(tài)。
3.如果一次效果還不理想，可重復(fù)多次，直到找到細(xì)胞合適的形態(tài)。這里需要注意的是要結(jié)合細(xì)胞的生長情況而定。
三、培養(yǎng)基的量
由于每種細(xì)胞的生長環(huán)境不同，對養(yǎng)料需求也是不相同的，這就需要我們?nèi)≌J(rèn)真了解每種細(xì)胞系的特性，根據(jù)細(xì)胞生長需求及細(xì)胞特性來選擇培養(yǎng)基類型和適宜的培養(yǎng)基添加劑。關(guān)于培養(yǎng)容器并不是小的玻璃方瓶12ml，大方瓶14ml的。有些細(xì)胞反而是培養(yǎng)基少一點，細(xì)胞形態(tài)會長得更好。（可對于生長速度快的細(xì)胞，易生長的細(xì)胞加少一點培養(yǎng)基細(xì)胞形態(tài)會更好。但是需要注意及時補(bǔ)液、換液，避免細(xì)胞死亡。
四、細(xì)胞培養(yǎng)瓶的選擇
在實驗過程中你常常會發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)生長速度快的細(xì)胞在玻璃瓶內(nèi)生長的狀態(tài)會比一次性塑料瓶相對好一些。而對于同一種細(xì)胞，在其生長旺盛快速的時期在玻璃瓶內(nèi)的生長狀態(tài)也比塑料瓶內(nèi)好。這可能是因為塑料瓶比玻璃瓶更容易貼壁。生長速度快的細(xì)胞在塑料瓶這種相對“更安逸"的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。
所以對于生長速度慢的細(xì)胞如果想要更漂亮的細(xì)胞狀態(tài)，塑料瓶比玻璃瓶會好，對于生長速度快的細(xì)胞，玻璃瓶則會更好。同樣，對于同一種細(xì)胞，在其生長速度慢的時候，塑料瓶會好一點，比如剛剛復(fù)蘇的時候，或者原代培養(yǎng)的時候。而在其生長旺盛的時候，玻璃瓶則相對會好一點。掌握了上面這些小技巧，就能培養(yǎng)出漂亮的細(xì)胞了。
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