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多克隆抗體和單克隆抗體之間的主要區(qū)別及應(yīng)用

 更新時(shí)間:2022-11-21 點(diǎn)擊量:966

什么是單克隆抗體
單克隆抗體定義:
與靶抗原上的特定表位結(jié)合的一種(單一)抗體構(gòu)成單克隆抗體。
單克隆抗體生產(chǎn)
為了產(chǎn)生單克隆抗體,是將免疫原注射到宿主動(dòng)物中。一旦免疫原引起免疫反應(yīng),脾臟中的 B 細(xì)胞就會(huì)被提取出來并與骨髓瘤細(xì)胞(癌細(xì)胞 B 細(xì)胞)融合。
健康的脾細(xì)胞不會(huì)在細(xì)胞培養(yǎng)中無限期地存活,因此進(jìn)行此融合過程以制造永生細(xì)胞系。通過該過程產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞系。
通過將脾臟中的單個(gè) B 細(xì)胞融合并培養(yǎng)到它們自己的雜交瘤中,產(chǎn)生了所有產(chǎn)生相同特異性抗體的 B 細(xì)胞的單一培養(yǎng)物。
B 細(xì)胞將單克隆抗體分泌到細(xì)胞培養(yǎng)基中。在這里,它們被提取出來進(jìn)行進(jìn)一步的測試和純化。
單克隆抗體雜交瘤克隆的產(chǎn)生提供了穩(wěn)定的可再生抗體來源,確保每批與前一批相同。
為了產(chǎn)生一種分泌富含抗體的液體(稱為腹水)的腫瘤,也可以將雜交瘤注射到小鼠的腹腔中。
單克隆抗體的用途:

  • 檢測特定抗原

  • 檢測蛋白質(zhì)家族的單個(gè)成員

  • 在實(shí)驗(yàn)/批次之間創(chuàng)建一致的結(jié)果

  • 對(duì)背景較少的細(xì)胞進(jìn)行染色——非常適合免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫熒光實(shí)驗(yàn)

  • 量化蛋白質(zhì)表達(dá)(例如流式細(xì)胞術(shù)或熒光激活細(xì)胞分選)

  • 檢測分子構(gòu)象的變化

  • 檢測磷酸化狀態(tài)的變化

  • 檢測 X 射線晶體學(xué)的目標(biāo)

  • 創(chuàng)建缺少特定細(xì)胞類型的動(dòng)物模型

  • 免疫療法


單克隆抗體不適用于:

  • 基于同源性檢測跨物種的靶蛋白

  • 檢測低水平的目標(biāo)蛋白

  • 檢測構(gòu)象改變的蛋白質(zhì)


多克隆單克隆
具有不同抗原互補(bǔ)位的異質(zhì)抗體群具有一個(gè)互補(bǔ)位的特異性抗體的同源群體
非表位特異性表位特異性
與相似抗原發(fā)生交叉反應(yīng)的可能性增加低交叉反應(yīng)性
背景噪音的可能性增加低背景噪音
批次變異性相同的批次
開發(fā)成本低開發(fā)成本高
快速生產(chǎn)(約 3 個(gè)月)生產(chǎn)緩慢(約 6 個(gè)月)
許多宿主物種選擇很少有宿主物種選擇

什么是多克隆抗體?
多克隆抗體定義:
與靶抗原上許多不同表位結(jié)合的許多(多)不同抗體構(gòu)成多克隆抗體。
多克隆抗體生產(chǎn)
將免疫原注射到宿主動(dòng)物體內(nèi)以產(chǎn)生多克隆抗體。動(dòng)物中的免疫反應(yīng)是由這種免疫原激活多個(gè) B 細(xì)胞引起的,所有這些 B 細(xì)胞都針對(duì)免疫原上的特定表位。
大量具有不同互補(bǔ)位的抗體由此產(chǎn)生,因此對(duì)靶蛋白的親和力不同。
 免疫后,可以直接從血清(去除凝血蛋白和紅細(xì)胞的血液)中使用這些多克隆抗體,或者將它們純化以獲得不含其他血清蛋白的溶液。
必須用抗原對(duì)新動(dòng)物進(jìn)行免疫以創(chuàng)建新批次,這意味著批次之間存在高度的可變性。
多克隆抗體的用途:

  • 檢測具有高抗原同源性的已知或未知抗原亞型

  • 檢測低水平的特定抗原

  • 盡可能多地捕獲抗原(例如免疫沉淀或染色質(zhì)免疫沉淀)

  • 檢測變性蛋白質(zhì)

  • 檢測具有可能的遺傳多態(tài)性、糖基化或構(gòu)象變化的靶標(biāo)

  • 跨多種檢測類型檢測天然蛋白質(zhì)

  • 在不同 pH 值和鹽濃度的溶液中檢測目標(biāo)


多克隆抗體不適用于以下領(lǐng)域:

  • 定量實(shí)驗(yàn),例如流式細(xì)胞儀,由于多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)導(dǎo)致信號(hào)放大,會(huì)導(dǎo)致不正確的結(jié)果

  • 與高同源蛋白存在交叉反應(yīng)問題的情況

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