Vero細(xì)胞近年來作為新時代制藥產(chǎn)業(yè)的熱門細(xì)胞，成為轉(zhuǎn)基因、蛋白、抗體類制藥企業(yè)普遍使用使用的載體工具。使用細(xì)胞生物反應(yīng)器進(jìn)行Vero細(xì)胞的規(guī)?；鲋车慕臃N工藝如下：
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
細(xì)胞∶Vero 細(xì)胞（ATCC級別的 ）、DMEM培養(yǎng)基(Hyclone)、新生牛血清、抗生素、除菌濾膜、CT-3微載體、2L實(shí)驗(yàn)室生物反應(yīng)器，5L搏旅/楚怡細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器、搖瓶、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、水浴鍋。
二、接種實(shí)驗(yàn)方法
1.微載體的預(yù)處理和滅菌： 接種實(shí)驗(yàn)前的微載體需要用無鈣、鎂離子的PBS磷酸鹽緩沖液進(jìn)行吸脹、洗滌，之后進(jìn)行高壓滅菌處理，工藝控制參數(shù)為：吸脹質(zhì)量濃度不超過50 g·L-1，滅菌溫度121 ℃，20 min。
2.轉(zhuǎn)瓶接種操作：
將培養(yǎng)瓶內(nèi)的 Vero 細(xì)胞接種于500ML的轉(zhuǎn)瓶內(nèi)，CT-3 微載體濃度為 3g/L，并加入適量的混合牛血清的DMEM培養(yǎng)基，此時接種密度以2.0×10°cells/mL為宜。
在微載體細(xì)胞生長過程中，可適當(dāng)補(bǔ)加微載體 2g/L，使微載體濃度達(dá)到 5g/L即可接種在5L細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器中作為種子細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
3.規(guī)模擴(kuò)培接種操作
當(dāng)細(xì)胞生長到達(dá)一定密度時，將細(xì)胞及新的微載體一起轉(zhuǎn)入大容積的微載體培養(yǎng)養(yǎng)反應(yīng)器中，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。此過程的工藝參數(shù)為：溫控： 37士0.1℃，溶解氧為 50%空氣飽和度，攪拌器的轉(zhuǎn)速維持在20～32 r/min即可。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá) 1.1×10'cells/mL時，即可進(jìn)入下游環(huán)節(jié)進(jìn)行產(chǎn)品生產(chǎn)。
介于國外生物反應(yīng)器成本高昂，售后服務(wù)不便，型號固定、貨期長等因素，我國自主研發(fā)設(shè)備生產(chǎn)的生物反應(yīng)器目前已廣泛應(yīng)用于制藥生產(chǎn)、新藥開發(fā)、蛋白研發(fā)、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品等環(huán)節(jié)，一些國內(nèi)生物反應(yīng)器專業(yè)生產(chǎn)商甚至可根據(jù)客戶要求的尺寸進(jìn)行定制化操作,比如搏旅除生產(chǎn)固定型號規(guī)格外，還可以根據(jù)客戶要求定制不同級別、規(guī)格的生物反應(yīng)器、發(fā)酵罐主要用于微生物培養(yǎng)、種子制備、浮細(xì)胞培養(yǎng)、貼壁細(xì)胞培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)等，實(shí)現(xiàn)了廠商直供，一罐多用，滿足不同的用戶需求。
